| 基于生物信息学分析的WRAP53β靶向联合治疗头颈鳞癌的作用研究 |
| |
| 引用本文： | 姚羽菲,刘炜,周茂林,邱廷亮,王琨.基于生物信息学分析的WRAP53β靶向联合治疗头颈鳞癌的作用研究[J].四川大学学报(医学版),2022,53(3):457-465. |
| |
| 作者姓名： | 姚羽菲 刘炜 周茂林 邱廷亮 王琨 |
| |
| 作者单位： | 1.口腔疾病研究国家重点实验室 国家口腔疾病临床医学研究中心 四川大学华西口腔医院 （成都 610041） |
| |
| 基金项目： | 四川大学华西口腔医院探索与研发项目;四川大学大学生创新创业训练计划项目 |
| |
| 摘 要： | 目的 探讨端粒酶新核心亚单位WD40-encoding RNA antisense to p53（WRAP53β）与头颈鳞癌（squamous cell carcinoma of the head and neck, HNSC）的临床、基因组和免疫浸润特征的关系，寻求HNSC的潜在靶向联合治疗方法。 方法 采用TIMER在线模块预测WRAP53β表达与TCGA队列中头颈肿瘤的临床特征、癌基因或免疫浸润之间的关系，TISCH网站分析其在单细胞水平的表达，通过CARE软件分析靶向WRAP53β的小分子抑制剂。体外实验验证中，合成shWRAP53β序列的重组慢病毒颗粒，构建稳定表达shWRAP53β的口腔鳞癌Cal27细胞（shWRAP53β组），并设置两个对照组（shNC组:Cal27细胞加入含非特异性对照序列的慢病毒颗粒，Con组:未处理的Cal27细胞）；MTT法检测3组细胞的增殖能力，细胞免疫荧光检测进一步定性检测shWRAP53β组和shNC组细胞中P53蛋白的表达；Western blot检测第18、23、28代shWRAP53β组和shNC组细胞的WRAP53β和DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达。最后，收集口腔鳞癌病例样本13例，口腔黏膜炎性病例样本7例，通过免疫组化验证口腔鳞癌临床标本中WRAP53β和γ-H2AX的表达情况。 结果 TIMER分析发现WRAP53β表达在HNSC中较正常组织显著高表达。WRAP53β基因水平与p53通路基因如CCNB1、CCNB2及CDK1呈显著正相关，与HPV阳性的头颈肿瘤炎症因子IFN-γ、IL-23A呈正相关，而与IL-1A、IL-6呈负相关，但与浸润免疫细胞无显著相关。TISCH单细胞测序数据集同样显示该基因在恶性细胞中呈高表达，在免疫细胞中表达水平极低或无表达。CARE评分预测对WRAP53β共抑制效果最强的药物为靶向ATM、CDK1和MDM4的抑制剂。体外细胞实验证实，与对照组相比，shWRAP53β组Cal27细胞的第5天到第7天的增殖能力下降（P<0.05），P53表达降低。Western blot检测示，与对照组相比，shWRAP53β组WRAP53β的表达水平在第18、23、28代均降低（P<0.05），γ-H2AX表达仅在第18、28代降低（P<0.05）。临床标本显示口腔鳞癌组织中γ-H2AX的阳性表达检出率高（12/13），口腔黏膜炎样本未检出WRAP53β阳性表达（0/7）。 结论 WRAP53β在HSNC中呈高表达水平，且与p53通路基因显著相关。ATM、CDK1和MDM4抑制剂可能是WRAP53β的潜在共抑制药物。干扰WRAP53β可能导致DNA损伤降低，从而具有对HNSC的治疗潜力。
|
| 关 键 词： | WRAP53β TIMER 生物信息学分析 免疫浸润 共抑制 |
| 收稿时间： | 2021-05-19 |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《四川大学学报(医学版)》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《四川大学学报(医学版)》下载全文 |
