| 稳定表达人巨细胞病毒蛋白 pUL23细胞系建立及其功能研究 |
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| 作者姓名： | 杨丹丽 肖小平 宫君原 员月明 李月琴 张欣 邹弈 周天鸿 李弘剑 |
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| 作者单位： | 1.暨南大学生命科学技术学院生物工程学系,广东,广州,510632 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目,国家自然科学基金重大计划面上资助项目,广东省自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的：建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据。方法：通过PCR技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23。将该载体导入AmphoPackTM-293细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系。采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位。结果：RT-PCR、Westernblotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白。共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23定位于细胞质,处于细胞核周边。结论：利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系。该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程。
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| 关 键 词： | 巨细胞病毒 基因 UL23 逆转录病毒 |
| 收稿时间： | 2009-12-01 |
| 修稿时间： | 2010-03-08 |
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