| 自噬通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡 |
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| 作者姓名： | 田华 马守原 康攀攀 郝奇 焦鹏 邵夏炎 徐晓燕 秦树存 姚树桐 |
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| 作者单位： | 1.泰山医学院动脉粥样硬化研究所, 山东省高校动脉粥样硬化重点实验室,山东,泰安,271000;2.中国人民解放军总医院南楼心血管内科,北京,100853;3.承德医学院附属医院,河北,承德,067000;4.泰山医学院基础医学院,山东,泰安,271000;5.,浙江,温州,325003;6.泰山医学院药学院,山东,泰安,271000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（No.81570410;No.81370381）;国家级大学生创新训练项目（No.201510439126;No.201510439100） |
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| 摘 要： | 目的：研究自噬对氧化低密度脂蛋白（oxidizedlow-densitylipoprotein,ox-LDL）所致巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法：体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA;3mmol/L）、雷帕霉素（rapamycin,Rap;1μmol/L）或4-苯丁酸（4-phenylbutyricacid,PBA;4mmol/L）预处理1h,再加入ox-LDL（100mg/L）继续培养12h。分别采用MTT法和AnnexinV-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况;相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶（lacticdehydrogenase,LDH）和细胞内caspase-3活性;采用Westernblot法检测自噬标志分子beclin-1和内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulatedprotein78,GRP78）及促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白（C/EBPhomologousprotein,CHOP）表达的变化;采用激光共聚焦显微镜观测细胞内微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associatedprotein1lightchain3,LC3）的变化。结果：ox-LDL处理可显著降低巨噬细胞活力,并增加LDH漏出、凋亡率及caspase-3活性;ox-LDL对细胞的上述损伤作用可被自噬抑制剂3-MA促进而被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1表达上调,LC3颗粒化显著;ox-LDL对自噬的诱导作用可被3-MA抑制而被Rap增强。另外,3-MA可促进ox-LDL所诱导的CHOP进一步上调,而Rap可明显拮抗ox-LDL对CHOP的诱导作用。PBA可显著抑制ox-LDL所诱导的GRP78上调,且明显减轻ox-LDL所诱导的自噬反应,表现为beclin-1表达下调,LC3颗粒化程度减弱。结论：内质网应激介导ox-LDL对巨噬细胞自噬的诱导作用,而一定程度的自噬可通过抑制CHOP表达从而减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞凋亡。
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| 关 键 词： | 自噬 内质网应激 氧化低密度脂蛋白 巨噬细胞 细胞凋亡 |
| 收稿时间： | 2016-07-04 |
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