| 人脐带间充质干细胞的快速分离、纯化及冻存 |
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| 作者姓名： | 王跃春 李业霞 段阿林 李佳穗 郑乔丹 |
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| 作者单位： | 1.暨南大学医学院生理学系,广东,广州,510632;2.,湖北,武汉,430022;3.广州市黄埔区红十字会医院,广东,广州,510760 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金博士科研启动项目,广东省医学科研基金资助项目,暨南大学"挑战杯"大学生课外学术科技创新活动研究项目 |
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| 摘 要： | 目的:建立在一般实验条件下快速分离、纯化及冻存人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的简便有效方法并研究其冻存复苏后的增殖及多向分化能力。方法:用胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及二步离心法从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs,通过把握传代时的消化程度及酸化培养基来快速纯化UC-MSCs,以流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定;用简易二步法(-4℃停留30 min,-20℃存放2 h,-80℃长期保存)冻存UC-MSCs,半年后复苏,扩增、传代,检测其胚胎干细胞特异性抗原Oct4、SSEA-4和人端粒酶逆转录酶hTERT的表达情况,并诱导其向神经元样细胞、成肌细胞和肝细胞样细胞分化。结果:通过双酶次序消化结合二步离心法,2 h可提取全脐带中的MSCs,原代培养7 d即可传代,通过适度消化传代和选用弱酸性培养基培养,第3代即可得到纯化的UC-MSCs,UC-MSCs表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45,极低表达HLA-DR、CD80、CD86和CD106。简易法冻存半年后复苏的UC-MSCs表达Oct4、SSEA-4和hTERT,可向三个胚层来源的细胞分化。结论:双酶次序消化结合二步离心法是从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs的一种简便有效方法,偏酸性环境有利于UC-MSCs的扩增及纯化;简易二步法冻存对UC-MSCs增殖和多向分化能力没有明显影响。
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| 关 键 词： | 脐带 间质干细胞 |
| 收稿时间： | 2010-01-11 |
| 修稿时间： | 2010-03-29 |
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