| 基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠的实验研究 |
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| 引用本文： | 张海,赵亚,李红武,师长宏,张彩勤,赵勇,刘佩娟,白冰,唐娟,白杰英.基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠的实验研究[J].实验动物与比较医学,2016(4). |
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| 作者姓名： | 张海 赵亚 李红武 师长宏 张彩勤 赵勇 刘佩娟 白冰 唐娟 白杰英 |
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| 作者单位： | 第四军医大学实验动物中心,第四军医大学实验动物中心,北京艾德摩生物技术有限公司,第四军医大学实验动物中心,第四军医大学实验动物中心,第四军医大学实验动物中心,第四军医大学实验动物中心,第四军医大学实验动物中心,第四军医大学细胞工程中心,军事医学科学院实验动物中心 |
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| 摘 要： | 目的：应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除编码小鼠T、B细胞的Rag2基因及编码NK细胞的IL2rg基因，构建T、B细胞及NK细胞联合免疫缺陷小鼠。方法：根据Genbank报道的Rag2及IL2rg基因序列，分别针对其外显子设计25bp左右的sgRNA并进行合成， sgRNA退火后克隆入pX330载体。Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA及Cas9重组质粒体外转录为mRNA后显微注射入BALB/c小鼠受精卵细胞，受精卵细胞移植到受体动物获得子代小鼠，首建鼠（F0）与野生型小鼠交配获得F1代小鼠，突变的F1代小鼠互交后筛选F2代纯合子小鼠。通过基因测序、流式细胞术及接种人源性肿瘤细胞系方法检测子代小鼠基因型和表型。结果：成功构建了Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA重组质粒并对其进行了体外转录，mRNA显微注射并移植后获得57只F0小鼠。连续交配后，获得F2代纯合子小鼠。序列分析表明子代小鼠中IL2rg有两个基因型，分别是10bp和11bp的缺失突变；而Rag2只有一个基因型，为8bp的缺失突变。与野生型BALB/c小鼠相比，小鼠外周血中CD3、B220及NKp46阳性细胞数量明显降低。接种人乳腺癌细胞系SKBR-2HL后，肿瘤生长良好，且随着时间延长肿瘤组织逐渐增大。结论：利用CRISPR/Cas9技术可有效实现BABL/c小鼠体内Rag2、IL2rg基因突变，并导致小鼠T、B及NK细胞功能异常。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 基因敲除 免疫缺陷小鼠 |
| 收稿时间： | 2016/5/6 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/5/13 0:00:00 |
Construction of severely combined immunodeficiency mice based on CRSIPR/Cas9 technology |
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| Zhang Hai,Zhao Y,Li Hongwu,Shi Changhong,Zhang Caiqin,Zhao Yong,Liu Peijuan,Bai Bing,Tang Juan and Bai Jieying.Construction of severely combined immunodeficiency mice based on CRSIPR/Cas9 technology[J].Laboratory Animal and Comparative Medicine,2016(4). |
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| Authors: | Zhang Hai Zhao Y Li Hongwu Shi Changhong Zhang Caiqin Zhao Yong Liu Peijuan Bai Bing Tang Juan and Bai Jieying |
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| Affiliation: | Laboratory Animal Center, Fourth Military Medical University,Laboratory Animal Center, Fourth Military Medical University,Beijing IDMO CO. LTD,Laboratory Animal Center, Fourth Military Medical University,Laboratory Animal Center, Fourth Military Medical University,Laboratory Animal Center, Fourth Military Medical University,Laboratory Animal Center, Fourth Military Medical University,Laboratory Animal Center, Fourth Military Medical University,Cell Engineering Research Center, Fourth Military Medical University,Laboratory Animal Center, Academy of Military Medical Sciences |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPR/Cas9 knockout immunodeficiency mice |
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