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骨碎补经骨髓间充质干细胞调节OPG/RANKL/RANK通路抑制破骨细胞的实验研究
引用本文:张峻玮,李琰,薛海鹏,李朝辉,聂伟志,徐展望.骨碎补经骨髓间充质干细胞调节OPG/RANKL/RANK通路抑制破骨细胞的实验研究[J].中国骨质疏松杂志,2019(5):617-624.
作者姓名:张峻玮  李琰  薛海鹏  李朝辉  聂伟志  徐展望
作者单位:山东中医药大学;山东省文登整骨医院;山东中医药大学附属医院
基金项目:国家自然科学基金项目(81473709);山东省中医药科技发展计划项目(2017-431)
摘    要:目的研究骨碎补作用绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)调节OPG/RANKL/RANK通路及对破骨细胞分化成熟的影响并探讨其可能的作用机制。方法实验大鼠去双侧卵巢造模,分为实验组(OVXDF,造模+骨碎补水煎液灌胃)、模型组(OVX,造模+0.9%生理盐水灌胃)、假手术组(SHAM,假手术+0.9%生理盐水灌胃),造模成功后提取BMSCs,将BMSCs和骨髓单核细胞共培养于Transwell小室的上室和下室,分为实验组+破骨细胞(OVXDF+OC)、模型组+破骨细胞(OVX+OC)、假手术组+破骨细胞(SHAM+OC)。下室加入破骨细胞诱导剂,倒置相差显微镜观察破骨细胞的分化成熟情况并计数,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测下室培养液中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、RANKL的含量,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测BMSCs中Wnt10b、β-catenin、RANKL、OPG mRAN及蛋白表达并计算RANKL/OPG。结果在共培养系统中,与去卵巢灌胃大鼠BMSCs共培养的破骨细胞(OVXDF+OC)数量较单纯模型组+破骨细胞(OVX+OC)明显减少(P<0.05)。下室培养液OPG含量及共培养BMSCs中Wnt10b、β-catenin、OPG mRAN及蛋白表达模型组+破骨细胞(OVX+OC)最低,RANKL及RANKL/OPG最高,经骨碎补灌胃后(OVXDF+OC)培养液中OPG含量及BMSCs细胞中Wnt10b、β-catenin、OPG mRAN及蛋白表达明显升高,培养液及BMSCs细胞中RANKL及RANKL/OPG明显降低(P<0.05)。结论骨碎补可调节BMSCs细胞OPG、RANKL的表达,激活OPG/RANKL/RANK信号通路抑制破骨细胞的分化和成熟,此作用可能与BMSCs的Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

关 键 词:中医中药  动物实验  破骨细胞  骨碎补  骨髓间充质干细胞  骨质疏松  大鼠

Rhizoma drynaria inhibits osteoclasts by regulating OPG/RANKL/RANK of bone marrow mesenchymal stem cells
ZHANG Junwei,LI yan,XUE Haipeng,LI Zhaohui,NIE Weizhi,XU Zhanwang.Rhizoma drynaria inhibits osteoclasts by regulating OPG/RANKL/RANK of bone marrow mesenchymal stem cells[J].Chinese Journal of Osteoporosis,2019(5):617-624.
Authors:ZHANG Junwei  LI yan  XUE Haipeng  LI Zhaohui  NIE Weizhi  XU Zhanwang
Affiliation:(Postgraduate School,Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Ji’nan 250014;Wendeng Osteopathic Hospital in Shandong Province,Wendeng 264400;Department of Orthopedics,the Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Ji'nan 250014,China)
Abstract:ZHANG Junwei;LI yan;XUE Haipeng;LI Zhaohui;NIE Weizhi;XU Zhanwang(Postgraduate School,Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Ji’nan 250014;Wendeng Osteopathic Hospital in Shandong Province,Wendeng 264400;Department of Orthopedics,the Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Ji'nan 250014,China)
Keywords:traditional Chinese medicine  animal experiment  osteoclasts  rhizoma drynariae  bone marrow mesenchymal stem cells  osteoporosis  rat
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