| 胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡 |
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| 作者姓名： | 卢娜 白瑞樱 魏林郁 李超堃 李新娟 赵红岗 李东亮 |
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| 作者单位： | 1.新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室,河南,新乡,453003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（No. 81271376; No.81371346; No.81100912） |
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| 摘 要： | 目的：观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法：培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule-associatedprotein1lightchain3-Ⅱ,LC3-Ⅱ）的表达。结果：（1）与对照组相比,不同浓度（3、6、9、12、15mmol/L）的ATP作用3h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖性;不同作用时间（1、2、3、6h）ATP（6mmol/L）也可使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,3h达高峰,呈时间依赖性。（2）ATP作用1h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多（P<005）,随时间延长,6h时降到对照水平;ATP作用1h时,LC3-Ⅱ表达显著增强（P<005）,形成高峰,与自噬空泡增多的时点重合,2h、3h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱,6h时降到对照水平。（3）与对照组相比,ATP作用3h后细胞凋亡率达高峰（P<005）,6h时仍然保持在3h的水平;cleavedcaspase-3表达量同步增强（P<005）,6h时达高峰。结论：胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡;自噬增强在前,凋亡高潮在后;随着ATP作用时间的延长,凋亡占主导地位。
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| 关 键 词： | 腺苷三磷酸 SH-SY5Y细胞 自噬 细胞凋亡 |
| 收稿时间： | 2014-02-12 |
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