| 摘 要： | 目的探究紫草素对肾透明细胞癌凋亡及抗失巢凋亡的作用及其机制。方法实验分为四组,对照组、紫草素低、中、高剂量组(1、2、4mg/mL),加入786-O人肾细胞腺癌细胞中,CCK8检测肾透明细胞癌细胞活力,细胞集落实验和poly-HEMA悬浮培养检测肾透明细胞癌失巢凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡能力;caspase-3试剂盒法检测肾透明细胞癌caspace-3活性,蛋白印迹(Western blot)检测细胞失巢凋亡相关信号FAK、Akt、Src、GSK3b活化情况以及下游靶基因表达情况。结果 CCK8检测细胞活力发现,与对照组比较,中、高剂量组紫草素对肾透明细胞癌细胞活力具有明显抑制作用,且随着紫草素剂量增加,细胞活力呈现剂量依赖性下降(43.55±4.87)%、(24.64±5.45)%比(100.00±2.33)%,P0.01]。将肾透明细胞癌786-O在软琼脂上培养10天形成集落,结果显示,与对照组比较,紫草素低、中、高剂量组细胞集落数明显减少(35.75±2.45)个、(19.48±1.37)个、(7.52±0.89)个比(50.23±4.21)个,P0.01],且呈剂量依赖性下降。poly-HEMA条件培养表明,紫草素能明显抑制细胞失巢悬浮后的聚团能力。流式细胞仪检测显示,与对照组比较,紫草素低、中、高剂量组细胞凋亡率上升(8.04%±0.98)%、(19.35±1.22)%、(35.25±1.35%)比(0.40±0.52)%,P0.05或P0.01];caspase-3细胞活性检测显示,无论是贴壁生长还是非粘性生长的肾透明细胞癌经紫草素处理后caspase-3活性均明显下降(P0.05或P0.01);Western blot结果显示,紫草素能明显降低肾透明细胞癌细胞786-O中FAK、Akt、Src、GSK3b磷酸化激活,与对照组比较差异均有显著性统计学意义;RT-PCR结果显示,紫草素能明显诱导FasL、Bim等促凋亡分子mRNA表达。结论紫草素能明显促进肾透明细胞癌凋亡并降低其抗失巢凋亡能力,其机制可能与紫草素抑制抗凋亡信号的激活和促凋亡信号caspase-3活化,进一步促进促凋亡分子FasL、Bim表达有关。
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