| ＲＮＡｉ沉默ＰＥＬＰＩ／ＭＮＡＲ基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用 |
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| 引用本文： | 万 璟,李小毛.ＲＮＡｉ沉默ＰＥＬＰＩ／ＭＮＡＲ基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用[J].中山大学学报(医学科学版),2013,34(6):811. |
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| 作者姓名： | 万 璟 李小毛 |
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| 作者单位： | 中山大学附属第三医院妇科， 广东 广州 ５１０６３０ |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（３０７７２３３２）；广东省医学科学基金（２０１２） |
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| 摘 要： | 【目的】 构建脯氨酸－谷氨酸－亮氨酸富集蛋白１（ＰＥＬＰ１）基因慢病毒表达载体，研究沉默ＰＥＬＰ１／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ）基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】 构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体，并转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ和ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入Ｅ２的培养基培养各组细胞，ＭＴＴ检测各组细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞生长周期情况；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＥＲ下游靶基因ｃ－ｆｏｓ，ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的蛋白表达水平。【结果】 成功构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体，转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，转染后 ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ的表达和蛋白的表达分别下降８６％和６５％（Ｐ ＜ ０．０５）。转染后Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞与对照组相比增殖抑制（Ｐ ＜ ０．０５）， 细胞周期Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增加，Ｓ期细胞比例减少 （Ｐ ＜ ０．０５）。加入雌激素后，三组细胞的生长速度加快，细胞Ｓ期的比例增加，转染组增殖抑制明显（Ｐ ＜ ０．０５），Ｓ期比例降低（Ｐ ＜ ０．０５）。转染组ＥＲ下游基因ｃ－ｆｏｓ、ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ１蛋白水平均显著降低（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 在子宫内膜癌细胞中沉默ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在Ｇ１期，下调ＥＲ靶基因蛋白表达，ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。
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| 关 键 词： | 子宫内膜癌 ＲＮＡ干扰 脯氨酸－谷氨酸－亮氨酸富集蛋白１／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子 慢病毒 |
| 收稿时间： | 2013-03-18 |
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